高二党必看期末复习攻略细胞工程考试

 

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专题2细胞工程

一、植物细胞工程

(一)植物组织培养技术

1、理论基础(原理):细胞全能性

细胞具有全能性的原因:每个细胞都含有该物种的全套遗传物质

全能性表达的难易程度:受精卵、生殖细胞、干细胞、体细胞;植物细胞、动物细胞,请排序受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;植物细胞>动物细胞

2、过程:离体的植物器官、组织或细胞(又称外植体)―→愈伤组织―→胚状体―→试管苗―→植物体愈伤组织的特点:一团没有特定结构和功能不处于旺盛分裂状态的薄壁细胞

脱分化:已经分化的植物细胞形成愈伤组织的过程

再分化:愈伤组织生长一段时间后,再移植到新的培养基上继续培养,从新诱导分化形成根和芽等器官的过程。

3、用途:微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产。

A植物繁殖

微型繁殖:可以高效快速地实现种苗的大量繁殖

作物脱毒:采用茎尖组织培养来除去病毒(因为植物分生区附近的病毒极少或没有)

人工种子:以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料,经人工薄膜包装得到的种子。优点:完全保持优良品种的遗传特性,不受季节的限制;方便储藏和运输

人工种子的结构包括:人工种皮、胚状体和人工胚乳。

B作物新品种培育

单倍体育种:

a过程:植株(AaBb)通过减数分裂得到花粉(AB、Ab、aB、ab四种类型);对花粉进行花药离体培养(技术是植物组织培养);得到单倍体植株;对其幼苗时期进行秋水仙素处理;得到了正常的纯合二倍体植株(AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型)。

b优点:明显缩短育种年限

(二)植物细胞培养:通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养,从而让它们能够产生大量的次级代谢产物。

注意:1、原理:细胞增殖

2、大规模获得细胞产品应用组织培养技术培养到愈伤组织阶段

(三)植物体细胞杂交技术

1、过程:

2、植物诱导融合的方法:物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇作为诱导剂。

(3)注意:a生理基础:细胞膜流动性,植物细胞全能性

b植物细胞融合前需用纤维素酶和果胶酶除去细胞壁

(3)意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。

二、动物细胞工程

一般包括动物细胞与组织培养、细胞核移植、体细胞克隆、细胞融合、单克隆抗体的制备等技术

(一)动物细胞培养

(1)概念:动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。(2)动物细胞培养的流程:

取动物组织块(动物胚胎或幼龄动物的器官或组织)→剪碎→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。

(3)细胞贴壁和接触抑制:悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。细胞数目不断增多,当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。

(4)动物细胞培养需要满足以下条件

①无菌、无毒的环境:培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素,以防培养过程中的污染。此外,应定期更换培养液,防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

②营养:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。

③温度:适宜温度:哺乳动物多是36.5℃+0.5℃;pH:7.2~7.4。

④气体环境:95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的,CO2的主要作用是维持培养液的pH。

(5)动物细胞培养技术的应用:制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质、培养医学研究的各种细胞。

(6)动物细胞培养与组织培养的主要区别动物细胞培养过程需要用胰蛋白酶等是组织块中的细胞分散

(二)动物体细胞核移植技术和克隆动物

1、哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植(比较容易)和体细胞核移植(比较难)。

2、选用去核卵(母)细胞的原因:卵(母)细胞比较大,容易操作;卵(母)细胞细胞质多,营养丰富。

3、体细胞核移植的大致过程是:

注意:(1)a细胞核移植b胚胎移植

(2)原理:细胞核全能性

(3)克隆羊性别:白面绵羊

4、体细胞核移植技术的应用:

①加速家畜遗传改良进程,促进良畜群繁育;②保护濒危物种,增大存活数量;

③生产珍贵的医用蛋白;④作为异种移植的供体;⑤用于组织器官的移植等。

5、体细胞核移植技术存在的问题:

克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。

(三)动物细胞融合

1、动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同,诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似,常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、电刺激等。

2、动物细胞融合的意义:克服了远缘杂交的不亲和性,成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。

3、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较:(重点记忆)

细胞工程

植物体细胞杂交

动物细胞融合

理论基础

细胞的全能性、细胞膜的流动性

细胞增殖、细胞膜的流动性

融合前处理

酶解法去除细胞壁(纤维素酶、果胶酶)

注射特定抗原,免疫处理正常小鼠

诱导手段

物理法:离心、振动、电激

化学法:聚乙二醇(PEG)

物理法:离心、振动、电激

化学法:聚乙二醇

生物法:灭活的病毒(灭活的仙台病毒)

诱导过程

第一步:原生质体的制备(酶解法)

第二步:原生质体融合(物、化法)

第三步:杂种细胞的筛选和培养

第四步:杂种植株的诱导与鉴定

正常小鼠免疫处理动物细胞的融合(物、化、生法)杂交瘤细胞的筛选与培养专一抗体检验阳性细胞培养单克隆抗体的提纯

用途和意义

克服远缘杂交的不亲和障碍,大大扩展杂交的亲本组合范围

应用:白菜-甘蓝等杂种植株

(1)制备单克隆抗体

(2)诊断、治疗、预防疾病,例如“生物导弹”治疗癌症

4.单克隆抗体

(1)a.抗体:一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。

b.B淋巴细胞特点:可以产生抗体,但不能无限增殖;

骨髓瘤细胞特点:能无限增殖,但不能产生抗体。

(2)单克隆抗体的制备过程:

(3)杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的特异性抗体。

(4)单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。

(5)单克隆抗体的作用:

①作为诊断试剂:准确识别各种抗原物质的细微差异,并跟一定抗原发生特异性结合,具有准确、高效、简易、快速的优点。

②用于治疗疾病和运载药物:主要用于治疗癌症治疗,可制成“生物导弹”(连接上抗癌药物的单克隆抗体),也有少量用于治疗其它疾病。

补充:

淋巴因子中的干扰素是治疗病毒的特效药,通常只能从体内获得,且数量非常的少,为了在体外获得大量的干扰素,我们可以用鼠的效应T淋巴细胞与其骨髓瘤细胞进行融合,进而从小鼠的腹水中或从培养液中提取。

干扰素是由效应T淋巴细胞产生的,所以在进行细胞融合时,选用的是效应T淋巴细胞和骨髓瘤细胞。

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专题一复习资料:

高二党必看

期末复习攻略——基因工程知识填空版

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